Preparació i requisits del reactiu de pollastre adrenomedullina (ADM)

1. Sèrum: coagulació a temperatura ambient durant 10-20 min, centrifugació durant 20 min a la velocitat de 2000-3000 r.pm. Recolliu el sobrenedant amb cura i torneu a centrifugar si apareixen precipitacions durant l’emmagatzematge.

2. Plasma: s’ha d’escollir EDTA o citrat de sodi com a anticoagulant segons els requisits de la mostra. Després de barrejar durant 10-20 minuts, centrifugar durant 20 minuts a la velocitat de 2000-3000 r.pm. Recolliu el sobrenedant amb cura i centrifugueu-lo de nou si es formen precipitacions durant l’emmagatzematge.

3. Orina: recollir amb un tub estèril, centrifugar durant 20 minuts a la velocitat de 2000-3000 r.pm. Recolliu el sobrenedant amb cura i centrifugueu-lo de nou si es formen precipitacions durant l’emmagatzematge. Implementació de referència de líquid toràcic i abdominal, líquid cefaloraquidi.

4. Supernatant de cultiu cel·lular: es recull amb tub estèril en detectar components exsudatoris. Centrífuga durant 20 minuts a la velocitat de 2000-3000 r.pm. Recolliu el sobrenadant amb cura. En detectar els components de les cèl·lules, la suspensió cel·lular es va diluir amb PBS (pH 7,2-7,4), i la concentració cel·lular va arribar a aproximadament 1 milió / ml. Mitjançant la congelació i descongelació repetides, les cèl·lules es destrueixen i s’alliberen els components intracel·lulars. Centrífuga durant 20 minuts a la velocitat de 2000-3000 r.pm. Recolliu el sobrenadant amb cura. Si es formen precipitacions durant la conservació, torneu a centrifugar.

5. Exemplar de teixit: després de tallar l’exemplar, peseu-lo. Afegiu una quantitat determinada de PBS, PH7.4. Crioconservació ràpida en nitrogen líquid per a un ús posterior. L'exemplar es manté a una temperatura de 2-8 ℃ després de fondre's. Es va afegir una certa quantitat de PBS (PH7.4) i es va homogeneïtzar totalment la mostra a mà o amb un homogeneïtzador. Centrífuga durant 20 minuts a la velocitat de 2000-3000 r.pm. Recolliu el sobrenadant amb cura. Dividiu-ne un per provar-lo i congeleu la resta per reservar.

6. Els exemplars s’han d’extreure el més aviat possible després de la recollida. L'extracció s'ha de dur a terme d'acord amb la literatura pertinent i els experiments s'han de fer tan aviat com sigui possible després de l'extracció. Si la prova no es pot realitzar immediatament, es pot guardar la mostra a -20 ℃, però s’ha d’evitar la congelació i descongelació repetides.

7. No es pot detectar la mostra que conté NaN3, perquè NaN3 inhibeix l'activitat de HRP.